污染物最常見的是生物性質的，包括 細菌、 真菌、 病毒和 寄生蟲。 限制 生物污染物 非常重要，因為它們可以 通過競爭營養(yǎng)物質、合成 堿性 、 酸性 或 有毒 副產物以及病毒成分對 細胞培養(yǎng)基因組的潛在干擾來改變培養(yǎng)細胞系的 表型 和基因型 。

細胞培養(yǎng) 是指使 真核 或 原核細胞 在 生理條件 下生長的實驗室方法。 它的起源可以追溯到 20 世紀初，當時它被引入研究 組織生長 和成熟、病毒生物學和 疫苗開發(fā) 、基因在疾病和健康中的作用，以及使用大規(guī)模雜交細胞系生產生物制藥。

培養(yǎng)細胞 的實驗應用 與可在體外生長的細胞類型一樣多種多樣。 然而，在臨床背景下，細胞培養(yǎng)最常與創(chuàng)建研究基本 細胞生物學 、復制疾病機制或研究新型藥物化合物的毒性的模型系統(tǒng)相關。 在這些應用中使用細胞培養(yǎng)的優(yōu)點之一是操縱基因和分子途徑的可行性。

此外，克隆細胞群或特定細胞類型的同質性以及明確的培養(yǎng)系統(tǒng)消除了干擾遺傳或環(huán)境變量，因此允許生成高再現性和一致性的數據，而這在研究整個器官系統(tǒng)時是無法保證的。

 無菌細胞培養(yǎng)實踐

事實上， 微生物感染 是體外細胞維持的主要問題。 細菌等 感染因子對真核細胞有毒，并最終導致細胞死亡。 此外，即使是低水平的污染也可能導致異常結果并導致錯誤的科學解釋。

通過采用多種確保細胞培養(yǎng)實驗室無菌的技術，研究人員可以減少污染的頻率和程度，并減少細胞、資源和時間的損失。 這可以通過消除微生物通過受污染的設備、培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)組件、培養(yǎng)箱、工作表面以及有缺陷或打開的細胞培養(yǎng)容器進入細胞培養(yǎng)物來實現。

鑒于大氣中充滿了具有潛在傳染性的 微粒 ，生物安全柜是限制非無菌氣溶膠和空氣中的成分污染培養(yǎng)細胞的最重要的設備。

生物安全柜應先用抗真菌清潔劑（例如 5% Trigene）凈化，然后用 70% 乙醇凈化。 所有進入生物安全柜的設備也需要用70%乙醇噴灑和擦拭。

噴有 70% 乙醇的一次性手套 和實驗室外套可以進一步減少頭發(fā)、皮膚細胞或灰塵攜帶的污染物的引入。

商業(yè)來源的培養(yǎng)基和補充細胞培養(yǎng)產品通常在無菌條件下提供。 此外，過濾滅菌允許生成基于非無菌培養(yǎng)試劑的細胞培養(yǎng)基，而高壓滅菌通常用于對與培養(yǎng)細胞接觸的設備進行滅菌。 液體的過濾滅菌可以通過 使用真空泵迫使液體通過 0.22μM 聚醚砜低結合過濾系統(tǒng)來實現。 添加抗生素（例如青霉素/鏈霉素）進一步限制了打開后的培養(yǎng)基瓶中和細胞培養(yǎng)容器中細菌生長的風險。

污染物最常見的是生物性質的，包括細菌、真菌、病毒和寄生蟲。 限制生物污染物非常重要，因為它們可以通過競爭營養(yǎng)物質、合成堿性、酸性或有毒副產物以及病毒成分對細胞培養(yǎng)基因組的潛在干擾來改變培養(yǎng)細胞系的表型和基因型。 其他污染物可能包括引入不需要的化學雜質（例如細胞培養(yǎng)容器中的增塑劑）或在實驗室共培養(yǎng)的其他細胞類型。

細菌污染

受 細菌污染影響的 細胞培養(yǎng)物 通常外觀渾濁。 此外，細菌的高代謝率可以改變培養(yǎng)基的pH值，從而將酚紅的顏色變成黃色。 雖然細菌在低顯微鏡放大倍數下可能被檢測為小顆粒，但它們獨特的形狀通常在較高放大倍數下被檢測到。 雖然大腸桿菌 等細菌菌株 由于其大小 (~2 μM) 和 鞭毛誘導的移動性而很容易被發(fā)現，但 支原體 等其他菌株的 大小較小 (<1 μM)、不可移動，因此不像支原體那樣容易被發(fā)現。很容易被檢測到。 結果， 支原體 感染可能會在較長時間內不被注意到，并且通常只有通過培養(yǎng)細胞質量下降才變得明顯。 這可以表現為細胞增殖減少和細胞死亡。 為了監(jiān)測細胞培養(yǎng)物是否存在 支原體 感染，建議使用聚合酶鏈反應 (PCR)、酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA) 或免疫染色定期檢測培養(yǎng)物是否存在支原體感染。

真菌污染

酵母出芽細胞呈卵圓形，可生長至約 4 μm 大小，因此在低顯微鏡放大倍數下很容易檢測到。 霉菌是真菌王國的其他成員，可以在細胞培養(yǎng)物中發(fā)現。 它們的生長以多細胞、高度連接的細絲（菌絲）的產生為標志。

病毒污染物的存在可能難以確認，但通常依賴于 PCR、ELISA、免疫細胞化學或電子顯微鏡。

病毒污染

病毒是依賴宿主細胞進行自身復制的感染因子。 由于它們的尺寸有限（最多 300 nm）及其細胞內生命周期，它們在普通光學顯微鏡中不可見并且很難檢測。 雖然某些病毒可能會誘導培養(yǎng)細胞的形態(tài)變化（細胞病變效應），但其他物種可能會整合到細胞基因組中并改變所研究細胞系的表型。

病毒 可以通過使用胰蛋白酶或胎牛血清等動物源性細胞培養(yǎng)產品進入細胞培養(yǎng)物，這對實驗室工作人員來說是一個嚴重的健康問題。 病毒污染物的存在可能難以確認，但通常依賴于 PCR 、 ELISA 、 免疫細胞化學 或 電子顯微鏡 。

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